2 × તાક પ્લેટિનમ પીસીઆર મિક્સ
પ્રવૃત્તિ વ્યાખ્યા
1 યુનિટ (યુ) તાક પ્લેટિનમ ડીએનએ પોલિમરેઝ પ્રવૃત્તિને એંસીમ જથ્થો તરીકે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે, જે 10 એનએમઓએલ ડીઓક્સીન્યુક્લિયોટાઇડ્સને એસિડ-અદ્રાવ્ય પદાર્થોમાં 74 ° સે પર 30 મિનિટની અંદર એક્ટિવેટેડ સmonલ્મોન સ્પર્મ ડીએનએનો ટેમ્પલેટ/પ્રાઇમર તરીકે ઉપયોગ કરવા માટે જરૂરી છે.
ગુણવત્તા નિયંત્રણ
SDS-PAGE શોધ દ્વારા શુદ્ધતા 99%થી વધુ છે; એક્ઝોજેનસ ન્યુક્લીઝની કોઈ પ્રવૃત્તિ શોધી શકાતી નથી; માનવ જીનોમમાં સિંગલ-કોપી જનીનને અસરકારક રીતે વિસ્તૃત કરી શકાય છે; ઓરડાના તાપમાને એક અઠવાડિયા સુધી સંગ્રહિત કરવામાં આવે ત્યારે કોઈ નોંધપાત્ર પ્રવૃત્તિ બદલાતી નથી.
મુખ્ય તકનીકી પરિમાણો
તેમાં 5′-3 ′ એક્ઝોન્યુક્લીઝ પ્રવૃત્તિ અને 3′-5 ′ એક્ઝોન્યુક્લીઝ પ્રવૃત્તિ છે, અને તેની વફાદારી Pfu પોલિમરેઝની બાજુમાં છે. તાક પ્લેટિનમ પોલિમરેઝની એક્સટેન્શન સ્પીડ Pfu પોલિમરેઝ કરતા ઝડપી છે અને એમ્પ્લીફિકેશન કાર્યક્ષમતા વધારે છે. પીસીઆર પ્રોડક્ટ્સને સીધા બ્લ endન્ટ એન્ડ સાથે જોડવામાં આવે છે અથવા ટીએ વેક્ટર સાથે ક્લોન કરી શકાય છે. જો ક્લોનીંગ કાર્યક્ષમતામાં સુધારો કરવાની જરૂર હોય, તો ટીએ વેક્ટરમાં ક્લોનિંગ કરતા પહેલા પહેલા શુદ્ધ કરવાની અને 3'-dA ઓવરહેંગ્સ ઉમેરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
વન-ટ્યુબ તાક પ્લેટિનમ માસ્ટરમિક્સ (નેશનલ હાઇ-ટેક પ્રોડક્ટ સર્ટિફિકેશન)
Q તાક પ્લેટિનમ માસ્ટરમિક્સે પીસીઆર પ્રતિક્રિયાની વિશિષ્ટતા અને સંવેદનશીલતામાં સુધારો કર્યો છે અને ઉચ્ચ જીસી સામગ્રી, ગૌણ માળખું અને તેના જેવા જટિલ નમૂનાઓને વિસ્તૃત કરી શકે છે. લક્ષ્ય નમૂનાની 2 જેટલી નકલો વધારી શકાય છે, વધુ સચોટ પ્રાયોગિક પરિણામો સુનિશ્ચિત કરે છે.
■ અનન્ય તાક પ્લેટિનમ માસ્ટરમિક્સ ફોર્મ્યુલા સમગ્ર પ્રતિક્રિયા પ્રણાલીને ખૂબ જ સ્થિર બનાવે છે, અને 4 ° સે તાપમાને પુનરાવર્તિત ફ્રીઝ-થાવ અથવા લાંબા ગાળાના સંગ્રહ દ્વારા પ્રવૃત્તિને અસર થશે નહીં.
Stable સ્થિર અને કાર્યક્ષમ પૂર્વ તૈયાર પીસીઆર મિશ્ર સોલ્યુશન ઓપરેશનને ઝડપી અને સરળ બનાવી શકે છે, શ્રમની તીવ્રતા અને નમૂનાની ભૂલને મોટા પ્રમાણમાં ઘટાડે છે. ઉચ્ચ પ્રદર્શન પીસીઆર વધારનાર અને optimપ્ટિમાઇઝર પણ મિશ્રણમાં સમાવવામાં આવેલ છે, જે પીસીઆર શરતો પર જરૂરિયાતો ઘટાડે છે.
Product આ પ્રોડક્ટમાં ડાઇ-ધરાવતી અને ડાય-ફ્રી સિસ્ટમ્સ બંને છે. ડાય-ધરાવતી માસ્ટરમિક્સ પ્રોડક્ટ્સ લોડિંગ બફર ઉમેર્યા વિના, પીસીઆર પછી સીધા ઇલેક્ટ્રોફોરેસ્ડ કરી શકાય છે.
અરજીઓ
તે જીનોમ જેવા જટિલ નમૂનાઓમાંથી ઉચ્ચ વફાદારીના ઉત્પાદનોને વિસ્તૃત કરવા માટે પીએફયુ પોલિમરેઝને બદલી શકે છે, અને તે અભિવ્યક્તિ જનીનોનું ક્લોનિંગ, સાઇટ-વિશિષ્ટ પરિવર્તન અને સિંગલ ન્યુક્લિયોટાઇડ પોલીમોર્ફિઝમ (એસએનપી) વગેરે જેવા વિશ્લેષણ માટે યોગ્ય છે.
પીસીઆર પ્રાઇમર્સ ડિઝાઇન કરવામાં સાવચેતી:
બાળપોથીની લંબાઈ સામાન્ય રીતે 20-25 મેર હોય છે. જો કે, લાંબા ટુકડા પીસીઆર કરતી વખતે, પ્રાઇમરની લંબાઈ વધારીને 30-35 મેર કરવી જોઈએ.
Pri બે પ્રાઇમર્સ વચ્ચે કોઈ પૂરક જોડી નથી, ખાસ કરીને 3 ′ છેડે છેલ્લા 3 પાયા માટે.
■ GC સામગ્રી 50-60%હોવી જોઈએ, અને સ્થાનિક સમૃદ્ધ GC અથવા AT ટાળો. પ્રાઇમર અને ટેમ્પલેટને મજબૂત રીતે બાંધવા માટે, 3 ′ છેડે સમૃદ્ધ માળખું ટાળો.
ગૌણ માળખું બનાવવા માટે પ્રાઇમર ટાળો.
M એકબીજાની નજીક Tm તાપમાન ધરાવતા બે પ્રાઇમર પસંદ કરો.
PCR માટે પ્રાઇમર્સના Tm મૂલ્યની ગણતરી:
જ્યારે પ્રાઇમર 20 મેરથી ઓછું હોય ત્યારે: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
■ જ્યારે પ્રાઇમર 20 મેરથી વધુ હોય: Tm = 81.5+0.41 G (GC%)-600/L, જ્યાં L એ પ્રાઇમરની લંબાઈ છે.
T (Tm-5) ° C પર એનિલીંગ તાપમાન સેટ કરો.
પીસીઆર પ્રાઇમર ઇનપુટ
પ્રાઇમર્સની યોગ્ય અંતિમ સાંદ્રતા 0.1 μM અને 1.0 μM વચ્ચે પસંદ કરી શકાય છે. ખૂબ ઓછી પ્રાઇમર સાંદ્રતા એમ્પ્લીફિકેશન ઉત્પાદનોની ઓછી ઉપજ તરફ દોરી જાય છે, જ્યારે ખૂબ highંચી પ્રાઇમર સાંદ્રતા બિન-વિશિષ્ટ વિસ્તરણ માટે વધુ સંવેદનશીલ હોય છે. સામાન્ય રીતે, જ્યારે નમૂના DNA ની માત્રા મોટી હોય અથવા જટિલ નમૂના DNA (જેમ કે માનવ જિનોમ DNA) નો ઉપયોગ નમૂના તરીકે થાય છે, ત્યારે બાળપોથીની સાંદ્રતા ઓછી હોવી જોઈએ. જ્યારે નમૂના DNA ની માત્રા નાની કે સરળ નમૂનો DNA (દા.ત., પ્લાઝમિડ DNA, વગેરે) નો ઉપયોગ નમૂના તરીકે થાય છે, ત્યારે પ્રાઇમર સાંદ્રતા વધારે હોવી જોઈએ.
બધા ઉત્પાદનો ODM/OEM માટે કસ્ટમાઇઝ કરી શકાય છે. વિગતો માટે,કૃપા કરીને કસ્ટમાઇઝ સર્વિસ (ODM/OEM) પર ક્લિક કરો
  |
1 kb ટુકડાને વધારવા માટે નમૂના તરીકે જીનોમિક DNA નો ઉપયોગ કરો PCR પ્રતિક્રિયા પછી, ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ તપાસ માટે 5 μl લો. |
A-1 ખાંચો
■ નમૂનામાં પ્રોટીન અશુદ્ધિઓ અથવા તાક અવરોધકો વગેરે છે DNA ડીએનએ નમૂનો શુદ્ધ કરો, પ્રોટીન અશુદ્ધિઓ દૂર કરો અથવા શુદ્ધિકરણ કીટ સાથે નમૂના ડીએનએ કાો.
Template નમૂનાનું વિકૃતિકરણ પૂર્ણ નથી den યોગ્ય રીતે વિકૃતિકરણ તાપમાનમાં વધારો અને વિકૃતિકરણનો સમય લંબાવવો.
■ ાંચો અધોગતિ the નમૂનો ફરીથી તૈયાર કરો.
એ -2 પ્રાઇમર
Pri પ્રાઇમર્સની નબળી ગુણવત્તા-પ્રાઇમરનું ફરીથી સંશ્લેષણ કરો.
■ પ્રાઇમર ડિગ્રેડેશન - ઉચ્ચ સાંદ્રતાવાળા પ્રાઇમર્સને બચાવવા માટે નાના વોલ્યુમમાં વહેંચો. બહુવિધ ઠંડું અને પીગળવું અથવા લાંબા ગાળાના 4 ° C ક્રિઓપ્રિઝર્વ્ડ ટાળો.
Pri પ્રાઇમર્સની અયોગ્ય ડિઝાઇન (દા.ત. પ્રાઇમરની લંબાઇ પૂરતી નથી, પ્રાઇમર્સ વચ્ચે ડીમર રચાય છે, વગેરે)
A-3 Mg2+એકાગ્રતા
■ એમજી2+ એકાગ્રતા ખૂબ ઓછી છે - એમજીમાં સારી રીતે વધારો2+ એકાગ્રતા: Mg ને પ્ટિમાઇઝ કરો2+ શ્રેષ્ઠ એમજી નક્કી કરવા માટે 0.5 મીમીના અંતરાલ સાથે 1 એમએમથી 3 એમએમ સુધીની પ્રતિક્રિયાઓની શ્રેણી દ્વારા એકાગ્રતા2+ દરેક નમૂના અને બાળપોથી માટે એકાગ્રતા.
A-4 એનિલીંગ તાપમાન
Anંચું neનિલીંગ તાપમાન બાળપોથી અને નમૂનાના બંધનને અસર કરે છે. Neએનિલિંગ તાપમાન ઘટાડવું અને 2 ° C ના withાળ સાથે સ્થિતિને પ્ટિમાઇઝ કરવી.
A-5 વિસ્તરણ સમય
■ ટૂંકા વિસ્તરણ સમય extension વિસ્તરણ સમય વધારો.
ઘટના: નકારાત્મક નમૂનાઓ લક્ષ્ય ક્રમ બેન્ડ પણ દર્શાવે છે.
PCR નું A-1 દૂષણ
Target લક્ષ્ય ક્રમ અથવા એમ્પ્લીફિકેશન પ્રોડક્ટ્સનું ક્રોસ દૂષણ fully નકારાત્મક નમૂનામાં લક્ષ્ય ક્રમ ધરાવતા નમૂનાને કાળજીપૂર્વક પાઇપેટ ન કરો અથવા તેમને સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાંથી બહાર ફેંકી દો. હાલના ન્યુક્લિક એસિડને દૂર કરવા માટે રીએજન્ટ્સ અથવા સાધનો ઓટોક્લેવ્ડ હોવા જોઈએ, અને નકારાત્મક નિયંત્રણ પ્રયોગો દ્વારા દૂષણનું અસ્તિત્વ નક્કી કરવું જોઈએ.
■ રીએજન્ટ દૂષણ re રીએજન્ટ્સને અલગ કરો અને નીચા તાપમાને સ્ટોર કરો.
A-2 પ્રાઇમr
■ એમજી2+ એકાગ્રતા ખૂબ ઓછી છે - એમજીમાં સારી રીતે વધારો2+ એકાગ્રતા: Mg ને પ્ટિમાઇઝ કરો2+ શ્રેષ્ઠ એમજી નક્કી કરવા માટે 0.5 મીમીના અંતરાલ સાથે 1 એમએમથી 3 એમએમ સુધીની પ્રતિક્રિયાઓની શ્રેણી દ્વારા એકાગ્રતા2+ દરેક નમૂના અને બાળપોથી માટે એકાગ્રતા.
■ અયોગ્ય પ્રાઇમર ડિઝાઇન, અને લક્ષ્ય ક્રમમાં બિન-લક્ષ્ય ક્રમ સાથે સમાનતા છે. -પ્રાઇમર્સ ફરીથી ડિઝાઇન કરો.
ઘટના: પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન બેન્ડ અપેક્ષિત કદ સાથે અસંગત હોય છે, મોટા અથવા નાના, અથવા કેટલીકવાર બંને ચોક્કસ એમ્પ્લીફિકેશન બેન્ડ અને બિન-વિશિષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન બેન્ડ થાય છે.
એ -1 પ્રાઇમર
Pri નબળી પ્રાઇમર વિશિષ્ટતા
-ફરીથી ડિઝાઇન પ્રાઇમર.
■ પ્રાઇમર એકાગ્રતા ખૂબ વધારે છે ro યોગ્ય રીતે વિકૃતિકરણ તાપમાનમાં વધારો કરો અને વિકૃતિકરણ સમયને લંબાવો.
A-2 Mg2+ એકાગ્રતા
Mg ધ એમજી2+ એકાગ્રતા ખૂબ વધારે છે - Mg2+ એકાગ્રતાને યોગ્ય રીતે ઘટાડો: Mg ને imizeપ્ટિમાઇઝ કરો2+ શ્રેષ્ઠ એમજી નક્કી કરવા માટે 0.5 મીમીના અંતરાલ સાથે 1 એમએમથી 3 એમએમ સુધીની પ્રતિક્રિયાઓની શ્રેણી દ્વારા એકાગ્રતા2+ દરેક નમૂના અને બાળપોથી માટે એકાગ્રતા.
એ -3 થર્મોસ્ટેબલ પોલિમરેઝ
En અતિશય એન્ઝાઇમ જથ્થો 0.5 0.5 યુના અંતરાલોમાં યોગ્ય રીતે એન્ઝાઇમની માત્રા ઘટાડવી.
A-4 એનિલીંગ તાપમાન
Ne એનિલીંગનું તાપમાન ઘણું ઓછું છે an યોગ્ય રીતે એનિલીંગ તાપમાનમાં વધારો કરો અથવા બે-તબક્કાની એનેલીંગ પદ્ધતિ અપનાવો
A-5 PCR ચક્ર
Many ઘણા બધા પીસીઆર ચક્ર - પીસીઆર ચક્રની સંખ્યા ઘટાડવી.
એ -1 પ્રાઇમરનબળી વિશિષ્ટતા-પ્રાઇમરને ફરીથી ડિઝાઇન કરો, તેની વિશિષ્ટતા વધારવા માટે પ્રાઇમરની સ્થિતિ અને લંબાઈ બદલો; અથવા નેસ્ટેડ પીસીઆર કરો.
A-2 ાંચો DNA
- નમૂનો શુદ્ધ નથી - નમૂનાને શુદ્ધ કરો અથવા શુદ્ધિકરણ કીટ સાથે ડીએનએ કા extractો.
A-3 Mg2+ એકાગ્રતા
—— એમજી2+ એકાગ્રતા ખૂબ વધારે છે - એમજીને યોગ્ય રીતે ઘટાડે છે2+ એકાગ્રતા: Mg ને પ્ટિમાઇઝ કરો2+ શ્રેષ્ઠ એમજી નક્કી કરવા માટે 0.5 મીમીના અંતરાલ સાથે 1 એમએમથી 3 એમએમ સુધીની પ્રતિક્રિયાઓની શ્રેણી દ્વારા એકાગ્રતા2+ દરેક નમૂના અને બાળપોથી માટે એકાગ્રતા.
A-4 dNTP
- dNTP ની સાંદ્રતા ખૂબ વધારે છે - dNTP ની સાંદ્રતા યોગ્ય રીતે ઘટાડવી
A-5 એનિલીંગ તાપમાન
Low ખૂબ ઓછું એન્નીલિંગ તાપમાન an યોગ્ય રીતે એનિલીંગ તાપમાનમાં વધારો
A-6 ચક્ર
- ઘણા બધા ચક્ર - સાયકલ નંબરને પ્ટિમાઇઝ કરો
પ્રથમ પગલું એ યોગ્ય પોલિમરેઝ પસંદ કરવાનું છે. નિયમિત તાક પોલિમરેઝ 3'-5 'એક્ઝોન્યુક્લીઝ પ્રવૃત્તિના અભાવને કારણે પ્રૂફરીડ કરી શકતું નથી, અને મેળ ન ખાવાથી ટુકડાઓની વિસ્તરણ કાર્યક્ષમતામાં ઘણો ઘટાડો થશે. તેથી, નિયમિત તાક પોલિમરેઝ 5 kb કરતા મોટા લક્ષ્ય ટુકડાઓને અસરકારક રીતે વિસ્તૃત કરી શકતું નથી. વિસ્તરણ કાર્યક્ષમતા સુધારવા અને લાંબા ટુકડા વિસ્તરણની જરૂરિયાતોને પહોંચી વળવા માટે ખાસ ફેરફાર અથવા અન્ય ઉચ્ચ વફાદારી પોલિમરેઝ સાથે તાક પોલિમરેઝ પસંદ કરવું જોઈએ. વધુમાં, લાંબા ટુકડાઓના એમ્પ્લીફિકેશન માટે પણ પ્રાઇમર ડિઝાઇન, ડિનેટરેશન ટાઇમ, એક્સટેન્શન ટાઇમ, બફર પીએચ, વગેરેને અનુરૂપ એડજસ્ટમેન્ટની જરૂર પડે છે. નમૂનાના નુકસાનને રોકવા માટે, ચક્ર દીઠ 94 ° C પર વિકૃતિકરણ સમય 30 સેકંડ અથવા ઓછો થવો જોઈએ, અને એમ્પ્લીફિકેશન પહેલાં તાપમાન 94 ° સે સુધી વધારવાનો સમય 1 મિનિટથી ઓછો હોવો જોઈએ. તદુપરાંત, વિસ્તરણ તાપમાનને લગભગ 68 ° C પર સેટ કરવું અને 1 kb/min ના દર અનુસાર વિસ્તરણ સમયની રચના લાંબા ટુકડાઓના અસરકારક વિસ્તરણને સુનિશ્ચિત કરી શકે છે.
ઉચ્ચ વફાદારી સાથે વિવિધ DNA પોલિમરેજનો ઉપયોગ કરીને PCR એમ્પ્લીફિકેશનનો ભૂલ દર ઘટાડી શકાય છે. અત્યાર સુધી મળેલા તમામ તાક ડીએનએ પોલિમરેજીસ પૈકી, પીએફયુ એન્ઝાઇમ સૌથી ઓછો ભૂલ દર અને સૌથી વધુ વફાદારી ધરાવે છે (જોડાયેલ કોષ્ટક જુઓ). એન્ઝાઇમ પસંદગી ઉપરાંત, સંશોધકો પ્રતિક્રિયાની સ્થિતિને optimપ્ટિમાઇઝ કરીને પીસીઆર પરિવર્તન દરને વધુ ઘટાડી શકે છે, જેમાં બફર કમ્પોઝિશન, થર્મોસ્ટેબલ પોલિમરેઝની સાંદ્રતા અને પીસીઆર ચક્ર નંબરને પ્ટિમાઇઝ કરવાનો સમાવેશ થાય છે.
ઉત્પાદનો શ્રેણીઓ
અમને શા માટે પસંદ કરો
તેની સ્થાપનાથી, અમારી ફેક્ટરી સિદ્ધાંતને વળગીને પ્રથમ વિશ્વકક્ષાના ઉત્પાદનો વિકસિત કરી રહી છે
ગુણવત્તા પહેલા. અમારા ઉત્પાદનોએ ઉદ્યોગમાં ઉત્તમ પ્રતિષ્ઠા મેળવી છે અને નવા અને જૂના ગ્રાહકો વચ્ચે મૂલ્યવાન વિશ્વાસ.
- ટેલ: +86 010-59822688
- બિલ્ડિંગ 5, નંબર 86, શુઆંગિંગ વેસ્ટ રોડ, ચાંગપિંગ ડિસ્ટ્રિક્ટ, બેઇજિંગ.
- people@tiangen.com
