ઝડપી સાઇટ-નિર્દેશિત મ્યુટેજેનેસિસ કિટ

લક્ષ્ય વેક્ટરમાં લક્ષ્ય જનીન પર ઝડપી સિંગલ-સાઇટ અથવા મલ્ટી-સાઇટ પરિવર્તન.

વિટ્રોમાં સાઇટ-નિર્દેશિત મ્યુટેજેનેસિસ જીવવિજ્ andાન અને દવાના વિવિધ ક્ષેત્રોમાં એક મહત્વની પ્રાયોગિક પદ્ધતિ છે, જેનો ઉપયોગ મોટાભાગે લક્ષ્ય જનીનોને સુધારવા અને optimપ્ટિમાઇઝ કરવા, પ્રમોટર્સની નિયમનકારી સાઇટ્સનું અન્વેષણ કરવા, તેમજ પ્રોટીન માળખું અને કાર્ય વચ્ચેના જટિલ સંબંધનો અભ્યાસ કરવા માટે થાય છે. કિટ વર્તમાન અગ્રણી તકનીકને અપનાવે છે જે સીધી રીતે સિંગલ સાઇટ મ્યુટેશન, મલ્ટી-સાઇટ મ્યુટેશન તેમજ લક્ષ્ય જનીન પર નિવેશ અથવા કાtionી નાખવાની પરિવર્તન લાવે છે. સિંગલ-સાઇટ પરિવર્તનનો પરિવર્તન દર 90%થી વધુ સુધી પહોંચી શકે છે. આ ઉપરાંત, પરંપરાગત પરિવર્તન કિટથી વિપરીત જેમાં PCR, પેટા ક્લોનિંગ અને અન્ય સમય માંગી લે તેવા અને શ્રમ-વપરાશના પગલાંની જરૂર પડે છે, કીટનું સંચાલન સરળ છે, અને મ્યુટન્ટ સ્ટ્રેન બનાવવા માટે માત્ર ચાર પગલાં જરૂરી છે.

બિલાડી. ના	પેકિંગ માપ
44992901	20 આરએક્સએન

અમને ઇમેઇલ મોકલો

ઉત્પાદન વિગત

પ્રશ્નો

ઉત્પાદન ટ Tagsગ્સ

વિશેષતા

■ સરળ અને ઝડપી: કીટ નોન-સ્ટ્રાન્ડ અવેજી પ્લાઝમિડ એમ્પ્લીફિકેશન ટેકનોલોજી અપનાવે છે. પીસીઆર અને પેટા ક્લોનિંગના બહુવિધ રાઉન્ડ જેવા સમય માંગી લેનાર અને શ્રમ-વપરાશના પગલાં વિના, જંગલી-પ્રકારનાં તાણથી મ્યુટન્ટ સ્ટ્રેનમાં પરિવર્તનને સમજવા માટે તેને માત્ર 4 પગલાંની જરૂર છે.
■ ઉચ્ચ કાર્યક્ષમતા પ્રાઇમર: કીટ આંશિક રીતે ઓવરલેપિંગ પ્રાઇમર ડિઝાઇનના સિદ્ધાંતને અપનાવે છે, જેથી એમ્પ્લીફિકેશન દ્વારા વધુ મ્યુટન્ટ પ્લાઝમિડ મેળવી શકાય.
Applicable વ્યાપકપણે લાગુ: કીટ માત્ર સિંગલ-સાઇટ પરિવર્તન જ નહીં, પણ મલ્ટી-સાઇટ પરિવર્તન પણ કરી શકે છે. તે 5 સાઇટ્સને બદલી શકે છે.
Adap મજબૂત અનુકૂલનક્ષમતા: કીટ મહત્તમ 10 kb ના કદ સાથે પ્લાઝમિડ પર સાઇટ-નિર્દેશિત પરિવર્તન કરી શકે છે, મૂળભૂત રીતે સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતા તમામ પ્લાઝમિડને આવરી લે છે.
Mut ઉચ્ચ પરિવર્તન દર: કિટમાં વિટ્રો અને વિવોમાં મેથિલેટેડ પ્લાઝમિડ નમૂનાઓના ડબલ પાચનનું કાર્ય છે, જે ઉચ્ચ પરિવર્તન દરને સુનિશ્ચિત કરે છે.

સાઇટ-મ્યુટેશન રિએક્શન સેટઅપ અને પીસીઆર પ્રોગ્રામ

Single સિંગલ પ્રાઇમર મલ્ટી-સાઇટ મ્યુટેશન માટે, મ્યુટેશન સાઇટ્સની વધતી સંખ્યાને કારણે મ્યુટેશન રેટ સિંગલ સાઇટ મ્યુટેશન કરતા ઓછો હશે. અમારા પ્રાયોગિક ડેટા મુજબ, જ્યારે પરિવર્તન સાઇટ્સની સંખ્યા 5 સુધી પહોંચે છે, ત્યારે પરિવર્તન હકારાત્મક દર ઘટાડીને 50%કરવામાં આવશે. તેથી, આ કિસ્સામાં, ચકાસાયેલ ક્લોન્સની સંખ્યામાં વધારો કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
■ કીટ મલ્ટી-પ્રાઇમર મલ્ટી-સાઇટ પરિવર્તનને સપોર્ટ કરે છે, જેથી પરિવર્તન પ્રયોગો જનીનની વિશાળ શ્રેણીમાં એક સાથે કરી શકાય. પરિવર્તન સાઇટ્સની સંખ્યાની ઉપરની મર્યાદા હજુ 5 છે.
Suggested એવું સૂચન કરવામાં આવે છે કે નવા પરિવર્તન પ્રયોગો હાથ ધરતી વખતે કીટમાં પૂરા પાડવામાં આવતા નિયંત્રણ પ્લાઝમિડ અને પ્રાઇમર્સ લાગુ કરવા જોઇએ જેથી પ્રાયોગિક સમસ્યાઓના વિશ્લેષણની સુવિધા મળી શકે.

Fast Site-Directed Mutagenesis Kit

બધા ઉત્પાદનો ODM/OEM માટે કસ્ટમાઇઝ કરી શકાય છે. વિગતો માટે,કૃપા કરીને કસ્ટમાઇઝ સર્વિસ (ODM/OEM) પર ક્લિક કરો

અગાઉના: માઉસ ટીશ્યુ ડાયરેક્ટ પીસીઆર કિટ

આગળ: 2, Pfu PCR મિક્સ

પ્ર: એમ્પ્લીફિકેશન બેન્ડ્સ નથી

A-1 ખાંચો

■ નમૂનામાં પ્રોટીન અશુદ્ધિઓ અથવા તાક અવરોધકો વગેરે છે DNA ડીએનએ નમૂનો શુદ્ધ કરો, પ્રોટીન અશુદ્ધિઓ દૂર કરો અથવા શુદ્ધિકરણ કીટ સાથે નમૂના ડીએનએ કાો.

Template નમૂનાનું વિકૃતિકરણ પૂર્ણ નથી den યોગ્ય રીતે વિકૃતિકરણ તાપમાનમાં વધારો અને વિકૃતિકરણનો સમય લંબાવવો.

■ ાંચો અધોગતિ the નમૂનો ફરીથી તૈયાર કરો.

એ -2 પ્રાઇમર

Pri પ્રાઇમર્સની નબળી ગુણવત્તા-પ્રાઇમરનું ફરીથી સંશ્લેષણ કરો.

■ પ્રાઇમર ડિગ્રેડેશન - ઉચ્ચ સાંદ્રતાવાળા પ્રાઇમર્સને બચાવવા માટે નાના વોલ્યુમમાં વહેંચો. બહુવિધ ઠંડું અને પીગળવું અથવા લાંબા ગાળાના 4 ° C ક્રિઓપ્રિઝર્વ્ડ ટાળો.

Pri પ્રાઇમર્સની અયોગ્ય ડિઝાઇન (દા.ત. પ્રાઇમરની લંબાઇ પૂરતી નથી, પ્રાઇમર્સ વચ્ચે ડીમર રચાય છે, વગેરે)

A-3 Mg²⁺એકાગ્રતા

■ એમજી²⁺ એકાગ્રતા ખૂબ ઓછી છે - એમજીમાં સારી રીતે વધારો²⁺એકાગ્રતા: Mg ને પ્ટિમાઇઝ કરો²⁺ શ્રેષ્ઠ એમજી નક્કી કરવા માટે 0.5 મીમીના અંતરાલ સાથે 1 એમએમથી 3 એમએમ સુધીની પ્રતિક્રિયાઓની શ્રેણી દ્વારા એકાગ્રતા²⁺ દરેક નમૂના અને બાળપોથી માટે એકાગ્રતા.

A-4 એનિલીંગ તાપમાન

Anંચું neનિલીંગ તાપમાન બાળપોથી અને નમૂનાના બંધનને અસર કરે છે. Neએનિલિંગ તાપમાન ઘટાડવું અને 2 ° C ના withાળ સાથે સ્થિતિને પ્ટિમાઇઝ કરવી.

A-5 વિસ્તરણ સમય

■ ટૂંકા વિસ્તરણ સમય extension વિસ્તરણ સમય વધારો.

પ્રશ્ન: ખોટા હકારાત્મક

ઘટના: નકારાત્મક નમૂનાઓ લક્ષ્ય ક્રમ બેન્ડ પણ દર્શાવે છે.

PCR નું A-1 દૂષણ

Target લક્ષ્ય ક્રમ અથવા એમ્પ્લીફિકેશન પ્રોડક્ટ્સનું ક્રોસ દૂષણ fully નકારાત્મક નમૂનામાં લક્ષ્ય ક્રમ ધરાવતા નમૂનાને કાળજીપૂર્વક પાઇપેટ ન કરો અથવા તેમને સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાંથી બહાર ફેંકી દો. હાલના ન્યુક્લિક એસિડને દૂર કરવા માટે રીએજન્ટ્સ અથવા સાધનો ઓટોક્લેવ્ડ હોવા જોઈએ, અને નકારાત્મક નિયંત્રણ પ્રયોગો દ્વારા દૂષણનું અસ્તિત્વ નક્કી કરવું જોઈએ.

■ રીએજન્ટ દૂષણ re રીએજન્ટ્સને અલગ કરો અને નીચા તાપમાને સ્ટોર કરો.

A-2 પ્રાઇમr

■ એમજી²⁺ એકાગ્રતા ખૂબ ઓછી છે - એમજીમાં સારી રીતે વધારો²⁺ એકાગ્રતા: Mg ને પ્ટિમાઇઝ કરો²⁺ શ્રેષ્ઠ એમજી નક્કી કરવા માટે 0.5 મીમીના અંતરાલ સાથે 1 એમએમથી 3 એમએમ સુધીની પ્રતિક્રિયાઓની શ્રેણી દ્વારા એકાગ્રતા²⁺ દરેક નમૂના અને બાળપોથી માટે એકાગ્રતા.

■ અયોગ્ય પ્રાઇમર ડિઝાઇન, અને લક્ષ્ય ક્રમમાં બિન-લક્ષ્ય ક્રમ સાથે સમાનતા છે. -પ્રાઇમર્સ ફરીથી ડિઝાઇન કરો.

પ્ર: બિન-વિશિષ્ટ વિસ્તરણ

ઘટના: પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન બેન્ડ અપેક્ષિત કદ સાથે અસંગત હોય છે, મોટા અથવા નાના, અથવા કેટલીકવાર બંને ચોક્કસ એમ્પ્લીફિકેશન બેન્ડ અને બિન-વિશિષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન બેન્ડ થાય છે.

એ -1 પ્રાઇમર

Pri નબળી પ્રાઇમર વિશિષ્ટતા

-ફરીથી ડિઝાઇન પ્રાઇમર.

■ પ્રાઇમર એકાગ્રતા ખૂબ વધારે છે ro યોગ્ય રીતે વિકૃતિકરણ તાપમાનમાં વધારો કરો અને વિકૃતિકરણ સમયને લંબાવો.

A-2 Mg²⁺ એકાગ્રતા

Mg ધ એમજી²⁺ એકાગ્રતા ખૂબ વધારે છે - Mg2+ એકાગ્રતાને યોગ્ય રીતે ઘટાડો: Mg ને imizeપ્ટિમાઇઝ કરો²⁺ શ્રેષ્ઠ એમજી નક્કી કરવા માટે 0.5 મીમીના અંતરાલ સાથે 1 એમએમથી 3 એમએમ સુધીની પ્રતિક્રિયાઓની શ્રેણી દ્વારા એકાગ્રતા²⁺ દરેક નમૂના અને બાળપોથી માટે એકાગ્રતા.

એ -3 થર્મોસ્ટેબલ પોલિમરેઝ

En અતિશય એન્ઝાઇમ જથ્થો 0.5 0.5 યુના અંતરાલોમાં યોગ્ય રીતે એન્ઝાઇમની માત્રા ઘટાડવી.

A-4 એનિલીંગ તાપમાન

Ne એનિલીંગનું તાપમાન ઘણું ઓછું છે an યોગ્ય રીતે એનિલીંગ તાપમાનમાં વધારો કરો અથવા બે-તબક્કાની એનેલીંગ પદ્ધતિ અપનાવો

A-5 PCR ચક્ર

Many ઘણા બધા પીસીઆર ચક્ર - પીસીઆર ચક્રની સંખ્યા ઘટાડવી.

પ્ર: પેચી અથવા સમીયર બેન્ડ્સ

એ -1 પ્રાઇમરનબળી વિશિષ્ટતા-પ્રાઇમરને ફરીથી ડિઝાઇન કરો, તેની વિશિષ્ટતા વધારવા માટે પ્રાઇમરની સ્થિતિ અને લંબાઈ બદલો; અથવા નેસ્ટેડ પીસીઆર કરો.

A-2 ાંચો DNA

- નમૂનો શુદ્ધ નથી - નમૂનાને શુદ્ધ કરો અથવા શુદ્ધિકરણ કીટ સાથે ડીએનએ કા extractો.

A-3 Mg²⁺ એકાગ્રતા

—— એમજી²⁺ એકાગ્રતા ખૂબ વધારે છે - એમજીને યોગ્ય રીતે ઘટાડે છે²⁺ એકાગ્રતા: Mg ને પ્ટિમાઇઝ કરો²⁺ શ્રેષ્ઠ એમજી નક્કી કરવા માટે 0.5 મીમીના અંતરાલ સાથે 1 એમએમથી 3 એમએમ સુધીની પ્રતિક્રિયાઓની શ્રેણી દ્વારા એકાગ્રતા²⁺ દરેક નમૂના અને બાળપોથી માટે એકાગ્રતા.

A-4 dNTP

- dNTP ની સાંદ્રતા ખૂબ વધારે છે - dNTP ની સાંદ્રતા યોગ્ય રીતે ઘટાડવી

A-5 એનિલીંગ તાપમાન

Low ખૂબ ઓછું એન્નીલિંગ તાપમાન an યોગ્ય રીતે એનિલીંગ તાપમાનમાં વધારો

A-6 ચક્ર

- ઘણા બધા ચક્ર - સાયકલ નંબરને પ્ટિમાઇઝ કરો

પ્રશ્ન: 50 μl PCR રિએક્શન સિસ્ટમમાં કેટલો નમૂનો DNA ઉમેરવો જોઈએ?

પ્ર: લાંબા ટુકડાઓ કેવી રીતે વધારવા?

પ્રથમ પગલું એ યોગ્ય પોલિમરેઝ પસંદ કરવાનું છે. નિયમિત તાક પોલિમરેઝ 3'-5 'એક્ઝોન્યુક્લીઝ પ્રવૃત્તિના અભાવને કારણે પ્રૂફરીડ કરી શકતું નથી, અને મેળ ન ખાવાથી ટુકડાઓની વિસ્તરણ કાર્યક્ષમતામાં ઘણો ઘટાડો થશે. તેથી, નિયમિત તાક પોલિમરેઝ 5 kb કરતા મોટા લક્ષ્ય ટુકડાઓને અસરકારક રીતે વિસ્તૃત કરી શકતું નથી. વિસ્તરણ કાર્યક્ષમતા સુધારવા અને લાંબા ટુકડા વિસ્તરણની જરૂરિયાતોને પહોંચી વળવા માટે ખાસ ફેરફાર અથવા અન્ય ઉચ્ચ વફાદારી પોલિમરેઝ સાથે તાક પોલિમરેઝ પસંદ કરવું જોઈએ. વધુમાં, લાંબા ટુકડાઓના એમ્પ્લીફિકેશન માટે પણ પ્રાઇમર ડિઝાઇન, ડિનેટરેશન ટાઇમ, એક્સટેન્શન ટાઇમ, બફર પીએચ, વગેરેને અનુરૂપ એડજસ્ટમેન્ટની જરૂર પડે છે. નમૂનાના નુકસાનને રોકવા માટે, ચક્ર દીઠ 94 ° C પર વિકૃતિકરણ સમય 30 સેકંડ અથવા ઓછો થવો જોઈએ, અને એમ્પ્લીફિકેશન પહેલાં તાપમાન 94 ° સે સુધી વધારવાનો સમય 1 મિનિટથી ઓછો હોવો જોઈએ. તદુપરાંત, વિસ્તરણ તાપમાનને લગભગ 68 ° C પર સેટ કરવું અને 1 kb/min ના દર અનુસાર વિસ્તરણ સમયની રચના લાંબા ટુકડાઓના અસરકારક વિસ્તરણને સુનિશ્ચિત કરી શકે છે.

પ્ર: પીસીઆરની એમ્પ્લીફિકેશન વફાદારી કેવી રીતે સુધારવી?

ઉચ્ચ વફાદારી સાથે વિવિધ DNA પોલિમરેજનો ઉપયોગ કરીને PCR એમ્પ્લીફિકેશનનો ભૂલ દર ઘટાડી શકાય છે. અત્યાર સુધી મળેલા તમામ તાક ડીએનએ પોલિમરેજીસ પૈકી, પીએફયુ એન્ઝાઇમ સૌથી ઓછો ભૂલ દર અને સૌથી વધુ વફાદારી ધરાવે છે (જોડાયેલ કોષ્ટક જુઓ). એન્ઝાઇમ પસંદગી ઉપરાંત, સંશોધકો પ્રતિક્રિયાની સ્થિતિને optimપ્ટિમાઇઝ કરીને પીસીઆર પરિવર્તન દરને વધુ ઘટાડી શકે છે, જેમાં બફર કમ્પોઝિશન, થર્મોસ્ટેબલ પોલિમરેઝની સાંદ્રતા અને પીસીઆર ચક્ર નંબરને પ્ટિમાઇઝ કરવાનો સમાવેશ થાય છે.

તમારો સંદેશ અહીં લખો અને અમને મોકલો

ઉત્પાદનો શ્રેણીઓ

અમને શા માટે પસંદ કરો

તેની સ્થાપનાથી, અમારી ફેક્ટરી સિદ્ધાંતને વળગીને પ્રથમ વિશ્વકક્ષાના ઉત્પાદનો વિકસિત કરી રહી છે
ગુણવત્તા પહેલા. અમારા ઉત્પાદનોએ ઉદ્યોગમાં ઉત્તમ પ્રતિષ્ઠા મેળવી છે અને નવા અને જૂના ગ્રાહકો વચ્ચે મૂલ્યવાન વિશ્વાસ.

તપાસ